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技术交流:猪瘟抗体elisa实验

阅读人数:287 发布时间:2019/5/8 11:19:35

 中国农业大学的陈老师于四月在我公司代测猪瘟抗体、狂犬病病毒、蓝耳病、白介素,干扰素等相关系列17个指标的ELISA实验:现需发表文献特来电咨询我公司关于猪瘟抗体等实验的详细操作流程以及结果判定方法。我司技术做出如下详细解答

实验操作方法:

1.用包被液将猪瘟弱毒单抗纯化联抗原、猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原各做100倍稀释,每孔包被100µl,4℃湿盒过夜。
2.次日取出,甩去孔内液体,3×3′冲洗。
3.将待检血清以PBS液做400倍稀释,每孔加100µl同时将猪瘟阳性血清、猪瘟阴性血清各做100倍稀释,于对照孔中加100μl。37℃温育1.5h~2h。
4.重复第二步,取出,甩去孔内液体,3×3′洗涤。
5.将兔抗猪IgG酶标抗体以PBS液做100倍稀释,每孔加100μl,37℃温育1.5h~2h。
6.重复第4步。
7.每孔加底物溶液100µl,室温下观察显色反应。当阴性对照孔稍显色时,立即终止反应,并以阴性孔做空白对照。
8.每孔加终止液50µl立即于酶联免疫吸附检测仪测定490nm波长的光密度。

结果判定
在猪瘟弱毒酶联板上,OD≥0.2,为猪瘟弱毒抗体阳性;OD<0.2,为猪瘟弱毒抗体阴性。
在猪瘟强毒酶联板上,OD≥0.5,为猪瘟强毒抗体阳性;OD<0.2,为猪瘟强毒抗体阴性。

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