技术文献>
小心!蛋白提取也是需要注意的

阅读人数:303 发布时间:2019/5/15 10:47:26

做科研的,难免不了的连夜做实验,写论文......其实这些对实验者来说根本算不了什么?或者来说他们也许早就适应了这样的日常。只是好多小细节不注意,可能让他们一夜回到解放前。不仅浪费了精力去做这个实验,而且也花了代价去购买这些试剂,所以说,好多细节是需要我们注意的。    

那么下面问题就来了:
1.如何提取细胞蛋白样品?
2.离心后上清出现白色粘稠的东西,很容易被吸上来,如何避免产生这种白色的东西?
3.吸到这种白色的东西,对WB结果有什么影响?

经过长期努力,我们找到以下答案:
1. 如何提取细胞蛋白样品?
冰上裂解30min,期间涡旋振荡一两次以充分裂解(冰盒 或者任何装有冰的容器,在摇床上震荡)
2.离心后上清出现白色粘稠的东西,很容易被吸上来,如何避免产生这种白色的东西?
白色的应该是分离开的核酸,这个是无法避免的,本来就是想把蛋白和核酸区分开。可以尝试使用超声破碎几次
3.吸到这种白色的东西,对WB结果有什么影响?
影响蛋白定量。如果目的蛋白是核蛋白,结果可能不好

但是我们也有相关事项需注意注意:
白色粘稠物质是细胞裂解不充分造成的,粘稠是染色质打开造成的,这是RIPA裂解提取蛋白通常都会遇到的,离心上清和沉淀会出现难分离的情况,现在有一种柱式法蛋白提取方法,可以很好的解决裂解之后粘稠的问题,不会出现不容组分,提取样品总蛋白核酸物质挂在柱子上,蛋白溶液在收集管中。裂解细胞,过柱子,收集管里就是所需要的蛋白。组织样品也一样简单操作5分钟即可获得总蛋白。无需担心样品粘稠,无需焦虑分离上清时沉淀的干扰。
 
联系我们>
  • 手机:13636351073,13262265854
  • 联系人:赵经理
  • Q Q:2881726252
  • 传真:021-64881400
  • 地址:上海市闵行区莘庄工业园区金都路3688号E幢103室

* 产品名称:
* 您的称呼:
* 您的单位:
* 联系电话:
* 验证码:  
提交