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这个夏天, 劲马带您走进免疫组化问题

阅读人数:420 发布时间:2019/7/10 9:20:01

很多年后,我们把这个夏天叫做“那年夏天”,但是那年夏天,我们曾笑得很美,很绚烂… 让我们在这个夏天一起走进免疫组化问题,上海劲马一一为您解答

1、染色过强

原因及相关解决方法

a 抗体浓度过高或孵育时间过长 降低抗体滴度、抗体孵育时间:室温1小时或4度过夜

b 孵育温度过高超过37度 一般在室温20-28度

c DAB显色时间过长或浓度过高 显色时间不超过5-12分钟,以显微镜下观察为准 

 

2、非特异性背景染色

原因及相关解决方法

a 操作过程中冲洗不充分: 每步冲洗3次每次5分钟

b 组织中含过氧化物酶未阻断 :可再配置新鲜3%H2O2封闭孵育时间延长

c 组织中含内原性生物素:正常非免疫动物血清再封闭

d 血清蛋白封闭不充分:延长血清蛋白封闭时间

 

3、染色弱

原因及相关解决方法 

a 抗体浓度过低、孵育时间过短:提高抗体浓度、孵育时间不能少 于60分钟

b 试剂超过有效使用时间: 应更换试剂

c 操作中添加试剂时缓冲液未沥干 :每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液

使试剂稀释 (应防止切片干燥)

d 室温太低 :低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分钟或4 度冰箱过夜

e 蛋白封闭过度:封闭不要超过12分钟

 

4、染色阴性

原因及相关解决方法 

a 操作步骤错误:应重试设阳性对照

b 组织中无抗原:设阳性对照以验证试验结果

c 一抗与二抗种属连接错误:仔细确定一抗二抗种属无误
    
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