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选择对的二抗,拥有甜甜的恋爱

阅读人数:258 发布时间:2019/8/28 9:41:47

    为确保分析试剂盒发挥良好的性能,选择高质量二抗对于确保特异性、灵敏度和一致性而言至关重要。选择二抗时,在关键应用中进行过验证可将因不可靠试剂导致实验失败的风险降至。遗憾的是,有验证数据且完好的二抗的使用范围有限。

    经证明,我们开发的一系列完好的二抗比竞争对手的同等产品和预吸附产品的特异性更高(见下文的对比研究)。我们已开发了7种不同的二抗,这些二抗可与HRP和生物素偶联,从而确保其在整个浓度范围内的高特异性。各产品数据表包含:

    关键应用中的数据验证以及多数情况下针对不同靶点的数据验证。此外,还提供了与竞争对手同等产品的比较数据,这些数据表明我们所开发的关键二抗性能更好。

    由于种属间免疫球蛋白存在高度同源性,所以二抗可能会与预期靶标种属以外的种属发生潜在交叉反应。对抗潜在交叉反应种属的抗体进行预吸附有助于程度地解决该问题。但是,很少有供应商提供预计二抗种属间交叉反应性的定量数据。多数情况下,供应商甚至不会提及二抗是否可能与其他种属发生潜在交叉反应。我们的每份数据表均包含关键种属的交叉反应性估测数据,因此您可以程度地进行最佳评估,以确保实验成功。


    我们通过蛋白质印迹对比了我们的山羊抗兔 IgG H&L (HRP) (ab205718) 与 2 种竞争产品的性能。竞争产品 A 为 ab205718 的同等产品,而竞争产品 B 已采用预吸附,可使种属间交叉反应降至,同时可限度地提高特异性。结果表明,与同等竞争产品和预吸附竞争产品相比,使用 ab205718 可显著降低非特异性结合。

样本
泳道 1、5 和 9:人脾裂解物 (10 μg)

泳道 2、6 和 10:人心裂解物 (10 μg)

泳道 3、7 和 11:小鼠脾裂解物 (10 μg)

泳道 4、8 和 12:小鼠心裂解物 (10 μg)


方法 
    在 MOPS 缓冲液系统下,使用 4% - 12% 的 Bis-tris 凝胶生成该印迹。将凝胶转移到硝酸纤维素膜上,然后用 2% 牛血清白蛋白封闭 1 小时,随后用 0.05 μg/mL 的二抗孵育。将膜在 ECL (ab133406) 中孵育并暴露 20 min 后,检测所有的非特异性背景结合情况。

    我们通过蛋白质印迹对比了我们的山羊抗大鼠 IgG H&L (HRP) (ab205720) 与同等竞争产品的性能。结果表明,与同等竞争产品相比,ab205720 在检测一抗 ab6161(抗微管蛋白的大鼠单克隆抗体)时的特异性更高。

样本
泳道 1:肝(人)组织裂解物 (10 μg)

泳道 2:肝(小鼠)组织裂解物 (10 μg)

泳道 3:肝(大鼠)组织裂解物 (10 μg)

泳道 4:HeLa 全细胞裂解物 (10 μg)

泳道 5:NIH 3T3 全细胞裂解物 (10 μg)

泳道 6:PC12 全细胞裂解物 (10 μg)

方法
    在 MOPS 缓冲液系统下,使用 4% - 12% 的 Bis-tris 凝胶生成该印迹。将凝胶转移到硝酸纤维素膜上,然后用 2% BSA 封闭 1 小时,随后用 ab6161 在 4℃ 下孵育过夜。将膜在 ECL (ab133406) 中孵育并暴露 15 s 后,使用 ab205720 二抗或同等竞争产品(稀释度为 1/5,000)检测抗体结合情况。

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