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ELISA试剂盒在实验前的准备有哪些?

阅读人数:103 发布时间:2019/10/25 8:59:49

    elisa试剂盒实验固相载体的挑选:很多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。
    包被抗体(或抗原)的挑选:将抗体(或抗原)吸附在固相载体外表时,请求纯度要好,吸附时一般请求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多选用4℃ 18~24小时。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌效果,应留意防护。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体,在运用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反响,调查其显色反响是不是均一性,据此判明其吸附性能是不是杰出。正式实验时,应别离以阳性对照与阴性对照操控实验条件,待检样品应作一式二份,以确保实验成果的性。

    在ELISA中,进行各项实验条件的挑选是很主要的,其间包含:
    有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是现在较为满足的供氢体。底物效果一段时刻后,应参加强酸或强碱以停止反响。一般底物效果时刻,以10-30分钟为宜。底物运用液必须新鲜制造,尤其是H2O2在临用前参加。然后再固定其它条件或采纳“方阵法”(包被物、待检样品的参阅品及酶符号抗体别离为不一样的稀释度)在正式实验体系里地滴定其作业浓度。有时本底较高,阐明有非特异性反响,可选用羊血清、兔血清或BSA等封闭。酶的底物及供氢体的挑选:对供氢体的挑选请求是价廉、安全、有明显地显色反响,而自身无色。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不一样的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它实验条件相同时,调查阳性标本的OD值。挑选OD值zui大而蛋白量起码的浓度。关于多数蛋白质来说一般为1~10μg/ml。ELISA试剂盒实验酶符号抗体作业浓度的挑选:首先用直接ELISA法进行开始效价的滴定(见酶符号抗体部份)。

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