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简述ELISA试剂盒规范曲线的制作关键

阅读人数:88 发布时间:2019/11/12 8:49:46

    很多试剂检查都涉及到规范曲线的疑问,elisa试剂盒规范曲线做的好与坏会直接影响到试验的成果,乃至是到试验的成败,那么终究怎么绘制或制造规范曲线呢?

    一、做规范曲线样品检查时有几个疑问需求注意

    1.样品的浓度等目标是依据规范曲线计算出来的,所以首先要把做规范曲线看作是比做正式试验还要主要的一件事,不然后边的试验成果无从谈起。

    2.设置规范曲线样品的规范浓度规模要有一个对比大的跨度,而且要能包括你所要检查试验样品的浓度,即样品的浓度要在规范曲线浓度规模以内,人ELISA试剂盒包括上限和下限。而对于呈S型的规范曲线,尽量要使试验样品的浓度在中心斜度zui陡段,即曲线简直成直线的规模内。

    3.选用倍比稀释法制造规范曲线中的规范样品浓度,ELISA试剂盒这么就能够确保规范样品的浓度不会出现较大的违背。

    4.检查规范样品时,应按浓度递加顺序进行,以削减高浓度对低浓度的影响,进步性。

    5.规范曲线的样品数通常为7个点,但zui少要确保有5个点。

    6.做出的规范曲线相数因试验要求不一样而有所变化,但通常来说,相数Rzui少要大于0.98,对于有些试验,zui少要0.99乃至是0.999.

    二、ELISA试剂盒挑选啥方程去拟合

    1.在S曲线的低浓度部分能够用乘幂方程极好的拟合,中低浓度部分能够用直线方程,中心部分可用对数方程,而中后段可用四参数。免疫检查时标准点(能够是倍比稀释的,也能够不是)浓度假设和相应的吸光度(OD)值假设能够出现直线当然是zui抱负的了,这时能够经过EXELL等利便的取得拟合曲线,进而推算出样品的浓度值。

    2.对于标准曲线的拟合办法,直线、二次曲线、三次曲线、指数、对数等虽都可用于ELISA及其它生物学反响中的曲线拟合,但都只合用于曲线的一部分,有的合用于前半段,有的合用于后半段,有的合用于中心一段,而Logistic曲线则对曲线的悉数都有较好的合用性。在一个长的区间内,Logistic应当都能拟合得较为抱负。假设用来定量,S形曲线的中心段(较陡处)是对比好的,而两真个平整部分计算误差会大,有时乃至会很大。用于免疫检查的所谓“标准曲线”真实称为拟合曲线对比适宜。现在国际上zui盛行的免疫检查拟合办法是“四参数逻辑拟合”,用这种拟合办法通常能够对比的反映浓度和吸光度的曲线,从而进一步对比的取得样品中待测物质的浓度值。但咱们做免疫检查很少有时候能够有这么抱负的情况,标品浓度和相应OD值通常是"S"型的曲线,这时就不能用直线拟合的办法了,而对拟合办法进行挑选即是必要的了。

    3.ELISA试剂盒枢纽在于你的标准曲线做到了S形的哪一部分,你想检查的样品浓度在曲线的哪一部分。ELISA试剂盒当然,假设用于定量,仍是在中心一段较好。但建模型是一回事,而用它来定量是另一回事。这些办法当然没有一种办法能够通用,但也都能够用。但并不是说它即是的。事实上不仅是ELISA,其它良多生物学反响都是S形曲线,也都能够用Logistic曲线拟合。

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