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  • 人转铁蛋白(TRF)ELISA试剂盒技术指导
  • 型号:
  • 所在地:美洲
  • 发布时间:2018/5/16 9:12:25
  • 采购热度:466
  • 简介内容:人转铁蛋白(TRF)ELISA试剂盒技术指导用于测定人血清、血浆及相关液体样本中转铁蛋白(TRF)含量。
详细介绍
人转铁蛋白(TRF)elisa试剂盒技术指导仅供研究使用。

检测范围:                                                     

1.5μg/mL -60μg/mL

使用目的:

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中转铁蛋白(TRF含量

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本转铁蛋白(TRF水平。用纯化的转铁蛋白(TRF抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入转铁蛋白(TRF),再与HRP标记的转铁蛋白(TRF抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的转铁蛋白(TRF呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品转铁蛋白(TRF浓度。

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1

7

终止液

6ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

8

标准品(100μg/mL

0.5ml×1

3

标包被

12孔×8

9

标准品稀释液

1.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1

10

说明书

1

5

显色剂A

6ml×1

11

封板膜

2张  

6

显色剂B

6ml×1/

12

密封袋

1

标本要求 

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

50μg/mL

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

25μg/mL

4号标准品

150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

12.5μg/mL

3号标准品

150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

6.25μg/mL

2号标准品

150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

3.125μg/mL

1号标准品

150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液


2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟   

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外

7. 温育:操作同3

8. 洗涤:操作同5

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

10. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

11. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结:

 

计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1试剂盒保存:2-8

2.有效期:6个月

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2.有效期:6个月

更新时间:2019/11/29 8:45:56

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